O Hibiscus sabdariffa L. é uma espécie vegetal que pertence à família Malvaceae, conhecido popularmente como hibisco, vinagreira, rosela, caruru- azedo, azedinha, caruru-da guiné, caruru-da-guiné, azeda-da-guiné, quiabo-azedo, quiabo- róseo. As partes aéreas do Hibiscus sabdariffa Linnaeus (vinagreira) foram encaminhadas para o Herbário Rosa Maria Mochel localizado na UEMA onde foram identificadas recebendo a numeração de exsicata 5935 e o material vegetal coletado foi enviado para o Núcleo de Ciência e Tecnologia de Alimentos do Instituto de Pesquisas Científicas e Tecnológicas do Estado do Amapá – IEPA. O presente estudo teve como objetivo avaliar in vitro a atividade antimicrobiana da fração hidroalcoólico em acetato de etila e diclorometano de vinagreira (Hibiscus sabdariffa L.), frente a cepas de Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa e Staphylococcus aureus de acordo com o método de disco-difusão como recomendado pela CLSI, com adaptações. A fração hidroalcoólico em acetato de etila e diclorometano da vinagreira foram avaliados quanto ao teor de compostos fenólicos totais e à atividade antioxidante por Cromatografia em coluna (CC) em sílica gel 60F tendo como fase móvel os solventes: hexano e acetato de etila nas proporções 8:2, 1:1, 2:8, acetato de etila e metanol 6:4. A análise em cromatografia em camada delgada (CCD) foi realizada com as frações da extração líquido-líquido e com as frações da cromatografia em coluna, sendo comparado com o padrão quercetina. O hibisco apresentou atividade antibacteriana distinta, provavelmente relacionada com o solo, clima e disponibilidade de fitonutrientes influenciando nas concentrações e mesmo na qualidade de polifenóis totais e antocianinas nas diferentes estruturas, o que justifica os valores encontrados no presente estudo. Os resultados sugerem a continuidade de estudos envolvendo as diferentes estruturas do hibisco e os fatores responsáveis pela sua atividade antimicrobiana (polifenóis totais e antocianinas).